Аннотация
Введение. Специфическая коагуляционная активность фактора свертывания крови VIIа зависит от наличия в молекуле данного белка N-ацетилнейраминовой (сиаловой) кислоты и фосфатных остатков. В связи с этим в качестве одного из критериев эффективности и безопасности лекарственных препаратов, содержащих данный белок, необходимо подтверждение подлинности профиля гликозилирования. Вместе с тем возможная вариабильность посттрансляционных модификаций требует индивидуального подхода к их оценке в соответствии с требованиями и рекомендациями по сравнению биоподобных препаратов. Материал и методы. В качестве объектов исследования использовали оригинальный препарат «НовоСэвен», биоподобный лекарственный препарат «Коагил-VII» и европейский референсный образец Human coagulation factor VIIa (rDNA) CRS. Для анализа олигосахаридной части применяли методы анионообменной хроматографии и высокоэффективной жидкостной хроматографии гидрофильного взаимодействия с флюоресцентным и масс-спектрометрическим детектированием. Результаты. В ходе исследования установлен основной набор модификаций молекул рекомбинантного фактора свертывания крови VIIa, представленный комплексными биантенными олигосахаридами с незначительным присутствием триантенных структур. Для биоподобного лекарственного препарата наиболее характерной является модификация дисиалированной галактозилированной комплексной группой с одним остатком фукозы. Заключение. Оценка профиля N-гликозилирования рекомбинантного фактора свертывания крови VIIa, основанная на сравнительном анализе биоподобного препарата, оригинального препарата и стандартного образца CRS выявила различия в количественном содержании гликанов при общем совпадении времен удерживания основных пиков всех образцов. Масс-спектрометрическое исследование позволило осуществить структурную интерпретацию полученных хроматографических данных. На примере биоподобного препарата показана необходимость использования при подтверждении подлинности гликопрофиля в качестве образца сравнения аттестованного установленным образом стандартного образца предприятия.
Авторы и аффилиации
О.Б. Устинникова(1), кандидат биологических наук, О.Б. Рунова(1), кандидат химических наук, А.А. Мовсесянц(1), доктор медицинских наук, профессор, Р.Р. Шукуров(2), кандидат биологических наук, М.А. Смолов(2), кандидат химических наук, Р.А. Хамитов(2), доктор медицинских наук, профессор 1-ФГБУ«Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Российская Федерация, 127051, Москва, Петровский б-р, д. 8, стр. 2; 2-ООО «Международный биотехнологический центр «Генериум»», Российская Федерация, 601125, Владимирская область, пос. Вольгинский, ул. Владимирская, д. 14 E-mail: ustinnikova@expmed.ru
Литература
Sutkeviciute I., Mistiniene E., Sereikaite J., Bumelis V. The influence of different glycosylation patterns on factor VII biological activity. Biochimie. 2009; 91: 1123–30.
Jurlander B., Thim L., Klausen N., Persson E., Kjalke M., Rexen P., Jorgensen T., Ostergaard P., Erhardtsen E., Bjorn S. Recombinant activated factor VII (rFVIIa): characterization, manufacturing and clinical development. Semin. Thromb. Hemost. 2001; 27: 373–84.
Руководство по биоподобным биологическим лекарственным препаратам, содержащим в качестве действующего вещества белки биотехнологического происхождения: вопросы качества EMEA/CHMP/BWP/49348/2005.
[Rukovodstvo po biopodobnym biologicheskim lekarstvennym preparatam, soderzhashchim v kachestve deystvuyushchego veshchestva belki biotekhnologicheskogo proiskhozhdeniya: voprosy kachestva EMEA/CHMP/BWP/49348/2005 (in Russian)]).
Гармонизированное трехстороннее руководство ICH. Спецификации: Методы испытаний и критерии приемлемости биотехнологических/биологических препаратов. Q6B. 1999.
[Garmonizirovannoe trekhstoronnee rukovodstvo ICH. Spetsifikatsii: Metody ispytaniy i kriterii priemlemosti biotekhnologicheskikh/biologicheskikh preparatov. Q6B. 1999 (in Russian)].
Нормативные правовые акты в сфере обращения лекарственных средств в рамках Евразийского экономического союза. Т. 3. Правила проведения исследований биологических лекарственных средств Евразийского экономического союза. М., 2017; 352.
[Normativnye pravovye akty v sfere obrashcheniya lekarstvennykh sredstv v ramkakh Evraziyskogo ekonomicheskogo soyuza. T. 3. Pravila provedeniya issledovaniy biologicheskikh lekarstvennykh sredstv Evraziyskogo ekonomicheskogo soyuza. M., 2017; 352 (in Russian)].
Ceroni A., Maass K., Geyer H., Geyer R., Dell A., Haslam S.M. GlycoWorkbench: a tool for the computer-assisted annotation of mass spectra of glycans. J. Proteome Res. 2008; 7: 1650–9.
Ranzinger R., Herget S., von der Lieth C.-W., Frank M. GlycomeDB – a unified database for carbohydrate structures. Nucleic Acids Res. 2011; 39: 373–6.
Klausen N., Bayne S., Palm L. Analysis of the site-specific asparagine-linked glycosylation of recombinant human coagulation factor VIIa by glycosidase digestions, liquid chromatography and mass spectrometry. Mol. Biotechnol. 1998; 9: 195–204.
Böhm E., Seyfried B., Dockal M., Graninger M., Hasslacher M., Neurath M., Konetschny C., Matthiessen P., Mitterer A., Scheiflinger F. Differences in N-glycosylation of recombinant human coagulation factor VII derived from BHK, CHO, and HEK293 cells. BMC Biotechnol. 2015; 15: 87–101.
Ghaderi D., Taylor R., Padler-Karavani V., Diaz S., Varki A. Implications of the presence of N-glycolylneuraminic acid in recombinant therapeutic glycoproteins. Nature Biotechnol. 2010; 28: 863–7.